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单细胞分选效率的分析
点击次数:5213 发布日期:2018-8-23  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

Namocell的单细胞分选效率

引言

在单克隆细胞培养时,手动有限稀释法是最经典的分离单细胞手段之一。这种方式分离单细胞,每个孔中落进去的细胞数目符合泊松分布。依靠单细胞分选仪器分离单细胞的效率,无论从分选能力还是重复性都要明显优于手动的有限稀释方法。测定一款设备分选效率的标准方法,是用荧光校准微球来分选检验。

实验方法

Namocell单细胞分离仪通过检测FITC荧光信号,来分选荧光校准微球(Spherotech)和用Calcein AM(Thermo Fisher Scientific)染色的CHO-S细胞。对于分离的细胞可以用Calcein AM染色,用于区分碎片、死细胞和活细胞,然后可以根据Namocell推荐的操作流程分离单个活细胞。为了去除细胞结团,在染色之后可以用40um左右的细胞筛网过滤细胞,尽量保证在上样的时候样本都是单个细胞。作为对照,我们采用1cell/well的细胞密度进行手动有限稀释法铺板。然后,用显微镜在明场下观察每个孔的细胞(或者微球)的数量。同样的实验持续7天,每天做一组对比实验,最后取平均值。通过统计孔板中单细胞、两个细胞和空孔的数量来衡量仪器的分选效率。

实验结论

在图例中展示了,用Namocell单细胞分离仪分离的微球和细胞以及手动铺板的数据对比。通过Namocell单细胞分离仪分选的荧光微球保持了很好的一致性---单细胞97%,两个细胞1%,空白2%。通过Namocell单细胞分离仪分选的细胞样本---单细胞93%,两个细胞2%,空白5%。对照样本数据,通过手动有限稀释法得到的分选效率---单细胞31%,两个细胞35%,空白34%。

在细胞样本的分散程度比较好的状态下,机器分离的最高单细胞比例是97%。对于手动有限稀释法而言,实验的结果一致性比较差(通过标准差可以看出)。综上所述,Namocell单细胞分离仪的分选效率和一致性要远优于手动有限稀释法。

图例:机器分离的微球和细胞的平均分选效率和手动分离的对比。

来源:诺诗乐生物科技(苏州)有限公司
联系电话:4000865580
E-mail:keli@namocell.com

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