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Leica:您的样本诊断流程小贴士来啦!
点击次数:846 发布日期:2019-8-1  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

第1-11步

徕卡101

样本的接收和转移

从患者到病理学家,准备样本进行诊断需要细心、经验以及合理的流程。

 

徕卡特地为大家整理了取材、组织处理、包埋、切片以及染色等(常规、特殊、IHC以及FISH)101步操作流程,帮助大家更有效、更简单地获得实验方案,避免错误的发生。

 

步骤一

避免机械性损伤

🙆 正确:小心移动组织,避免机械损伤。外科以及解剖过程中,在任何需要新鲜组织的情况下,都必需非常小心地采集组织样本;

🙅 错误:组织在固定前由于挤压和撕裂引起的机械损伤。

淋巴组织:典型的人为挤压引起的损伤。在图中表现为暗而变形的细胞核,以致其中一些细胞拉长而呈强的嗜碱性。

 

步骤二

避免样本干燥

🙆 正确:避免样本在固定前干燥。如果不能马上进行固定的话,使用含生理盐水的湿纱布覆盖避免干燥;

🙅 错误:组织在固定前在吸水的材料表面放置一段时间。

这块新鲜的组织刚从患者的体内取出。由于它被放在托盘中而且环境温度较高,如果不马上进行固定的话就会迅速变干引起组织损伤。

 

步骤三

避免热损伤

🙆 正确:尽可能避免样本局部过热引起的损伤(一些灼烧损伤可能是没法避免的);

🙅 错误:一些不必要的局部过热引起组织损伤,新鲜组织特别容易因此受损。

乳腺组织边缘部分区域的细胞呈强嗜酸性并已丢失细胞核和细胞质详情。其原因在于采集样本过程中, 灼烧引起局部过热而导致损伤,相邻的腺体组织没有受到影响。

 

步骤四

避免化学损伤

🙆 正确:外界化学物质(如:消毒剂)对新鲜组织的污染;

🙅 错误:还没有经过固定的组织很容易被外界化学物质浸润和破坏。

Monsel溶液(碱式硫酸铁溶液)是一个典型的止血剂,用于控制活检组织粘膜的血液流动,它能够引起粘膜表面的血液凝固与细胞坏死。如果应用在活检,则容易引起局部嗜碱性以及早期坏死的现象,从而导致病理改变。Monsel溶液损伤,常见于重新进行活检取材或者手术切除后。图A:H&E染色后的宫颈活检图以及图B:用Perl染色后的组织表面表现出大量的铁沉积,两图都能体现该现象。

 

步骤五

正确进行样本标记

🙆 正确:组织样本必需容易辨识,所有的样本细节必需及时记录清楚;

🙅 错误:组织样本细节记录延迟,信息提供不完整。

这块新鲜的组织刚从患者的体内取出。由于它被放在托盘中而且环境温度较高,如果不马上进行固定的话就会迅速变干引起组织损伤。

 

步骤六

确保及时固定

🙆 正确:必需进行及时固定,如果样本不能马上进行固定的话,短时间内可以保存在4℃的冰箱中;

🙅 错误:固定延迟(组织结构在离体后就随即开始发生变性)。


A. 此尸检肝样本(H&E)没有及时固定,导致核界限以及细胞质细节不清楚,中心血管内出现大量细菌;
B. 此切片肌肉纤维组织的核染色质保存不完整,就是固定不及时引起的。

 

步骤七

使用合适的试剂和容器进行固定

🙆 正确:合适量的固定试剂(固定液和组织比例至少为20:1)放在合适大小的容器中,这可以避免新鲜组织损伤,确保高质量固定;

🙅 错误:组织样本被挤在一个小的容器当中,导致样本因没有被全部覆盖到而固定不充分。

大量组织挤在一个很小的容器中,组织挤在小的容器中可导致组织损伤、固定不充分。

 

步骤八

检查固定液的pH值

🙆 正确:高质量固定试剂以及最优的pH值;

🙅 错误:固定液质量差,pH值不明确。酸性的福尔马林会很快与细胞内免疫球蛋白发生反应,产生蛋白交联。而接近中性的福尔马林溶液虽然也会和免疫球蛋白发生反应,但是反应速度会相对慢一点。进行染色前,需要进行修复,以恢复免疫球蛋白结构。


A. 使用了不合适的pH值,正常的福尔马林缓冲液pH值必需在6.8-7.0之间。
B. 血管染色图中有棕褐色颗粒状沉淀,就是所谓的蛋白交联(酸性福尔马林引起)。酸性福尔马林很容易形成这种蛋白交联,特别是红细胞。

 

步骤九

促进大标本的固定

🙆 正确:为了固定液能迅速的渗透入样本中需要控制样本的大小。大标本可以在采集后送到实验室进行初步分割后固定(可以考虑切成多条以促进固定);

🙅 错误:大组织样本在取材前虽然延长了固定时间,但样本中间还是可能没有固定好或者有明显的变形。

猪的心脏被切成多条,从而促进组织样本的固定,这些碎条大概有4-5 mm厚。

 

步骤十

避免固定过度

🙆 正确:固定时间适宜-及时送检;

🙅 错误:组织样本固定时间有时候过长——组织样本没有按照不同的优先时间进行转移。

按照固定时间的先后送检组织,尤其是含有冰冻标本的时候。

 

步骤十一

轻取样本

🙆 正确:轻取样本——保证质脆样本形态完好;

🙅 错误:粗鲁地拿取样本——质脆样本很容易受损。

样本转移过于粗鲁,容器底部沉积了很多组织碎片。即便是组织致密的标本现在也成了组织碎片。

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来源:北京昊诺斯科技有限公司
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